“這里是與病毒‘零距離’接觸的地方，整個(gè)實(shí)驗(yàn)室完全密封，室內(nèi)處于負(fù)壓狀態(tài)，我們喜歡用‘三流’來(lái)形容它，即人流、物流、氣流的單向流動(dòng)，確保在里面的污染物不會(huì)泄漏到外面而造成污染?！睆V東省第二人民醫(yī)院P3實(shí)驗(yàn)室主任林劍國(guó)說(shuō)，“這里”指的就是P3實(shí)驗(yàn)室。廣東省第二人民醫(yī)院每天400多份新冠肺炎核酸檢測(cè)就是在這里開展的。

現(xiàn)在，我們一起來(lái)揭開廣東省第二人民醫(yī)院P3實(shí)驗(yàn)室的神秘面紗，看看病毒究竟在P3實(shí)驗(yàn)室是怎樣被“揪出來(lái)”的？

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揭秘一：前世今生

P3實(shí)驗(yàn)室是生物安全防護(hù)三級(jí)實(shí)驗(yàn)室，P是Protection的縮寫。整個(gè)實(shí)驗(yàn)室完全密封，室內(nèi)處于負(fù)壓狀態(tài)，從而使實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部的氣體不會(huì)泄漏到外面而造成污染，也就是“氣流”的單向流動(dòng)。實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室是指實(shí)驗(yàn)室的結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備能夠確保工作人員在處理含有致病微生物及其毒素時(shí)，不受實(shí)驗(yàn)對(duì)象侵染，周圍環(huán)境不受污染。

根據(jù)微生物及其毒素的危害程度不同，分為四級(jí)，一級(jí)最低，四級(jí)最高。廣東省第二人民醫(yī)院新冠病毒核酸檢測(cè)就是在P3實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行的。

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揭秘二：抽絲剝繭

核酸檢測(cè)是確診新冠肺炎的“金標(biāo)準(zhǔn)”，而檢測(cè)流程中的每一個(gè)環(huán)節(jié)都是精細(xì)活，容不得半點(diǎn)馬虎。在操作中，實(shí)驗(yàn)員面對(duì)眼前的樣本，需要“一個(gè)一個(gè)地揭開蓋子，開蓋加樣和核酸提取”，這無(wú)疑是與“病毒”正面交鋒，現(xiàn)在來(lái)看省二醫(yī)的實(shí)驗(yàn)員是如何一一過(guò)招。

實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的檢測(cè)流程可分為5個(gè)步驟：樣本進(jìn)入“傳遞窗”——滅活處理——開蓋加樣和核心提取——擴(kuò)增反應(yīng)判斷結(jié)果——高壓滅菌。

第一步，樣本進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室也有講究——“傳遞窗”隔離空氣。
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“傳遞窗”也叫Air Lock（空氣鎖）

采集的檢測(cè)樣本如咽拭子或肛拭子，在進(jìn)入P3實(shí)驗(yàn)室前就得先進(jìn)入一個(gè)特殊的窗口——“傳遞窗”，這個(gè)窗口也叫Air Lock，空氣鎖。顧名思義，與空氣有關(guān)，這個(gè)傳遞窗有不能同時(shí)打開的雙重門，保證傳遞樣本時(shí)帶進(jìn)去的空氣被隔離在雙重門中，保證實(shí)驗(yàn)室外的環(huán)境不受污染。這也是“三流”中“物流”，樣本的命運(yùn)起點(diǎn)，在這里開啟它在實(shí)驗(yàn)室中短暫的一生。
第二步，檢測(cè)前的滅活處理——不一定但相對(duì)的安全。
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標(biāo)本處理間，在這里進(jìn)行開蓋加樣和核酸提取。

樣本在水浴箱經(jīng)半個(gè)小時(shí)56℃高溫滅活，這樣會(huì)使病毒蛋白不再有生理活性，失去感染、致病和繁殖能力，在對(duì)樣本進(jìn)行檢測(cè)時(shí)相對(duì)安全，但是病毒蛋白的基因序列并沒有受到影響。

第三步，檢測(cè)的核心環(huán)節(jié)——進(jìn)行開蓋加樣和核酸提取。
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通過(guò)核酸擴(kuò)增儀進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。

第四步，擴(kuò)增反應(yīng)——45個(gè)循環(huán)繪制熒光曲線判斷結(jié)果。
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根據(jù)曲線和參數(shù)分析判斷結(jié)果。

提取的核酸送到核酸檢測(cè)室內(nèi)，就要上儀器了。提取的核酸加入擴(kuò)增試劑中，通過(guò)熒光PCR儀進(jìn)行RT-PCR反應(yīng)，先將提取的核酸逆轉(zhuǎn)錄成DNA，再以DNA為模版，對(duì)特定位點(diǎn)進(jìn)行擴(kuò)增，利用不同的溫度進(jìn)行變性、退火和延伸，每個(gè)循環(huán)采集熒光值，45個(gè)循環(huán)后繪制熒光曲線，用時(shí)約110分鐘，實(shí)驗(yàn)員根據(jù)熒光曲線分析判斷結(jié)果的陰性和陽(yáng)性。

第五步，污染物的高壓滅菌處理。

實(shí)驗(yàn)過(guò)程產(chǎn)生的污物通過(guò)高壓滅菌后，按相關(guān)普通醫(yī)療垃圾處理?！拔锪鳌钡慕K點(diǎn)在這里就結(jié)束了。
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產(chǎn)生的污物通過(guò)高壓滅菌后，按相關(guān)醫(yī)療垃圾處理

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揭秘三：傾柯衛(wèi)足

“三流”中的“人流”又是什么？來(lái)看看工作人員是如何工作的。

首先在清潔區(qū)內(nèi)穿戴中級(jí)防護(hù)服——通過(guò)緩沖間進(jìn)入到實(shí)驗(yàn)室內(nèi)負(fù)壓工作間，在這里進(jìn)行標(biāo)本處理，核酸提取及檢測(cè)——完畢后進(jìn)行空間、表面消毒，按順序脫下防護(hù)服——通過(guò)淋浴間更衣后，回到清潔區(qū)。這些步驟一個(gè)都不能少！
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通過(guò)緩沖間進(jìn)入到實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。

核酸檢測(cè)的主要宗旨是高效、有序和安全。其中安全是重中之重，尤其是工作人員的安全。到目前為止，P3實(shí)驗(yàn)室未出現(xiàn)過(guò)生物安全問(wèn)題，當(dāng)然也與平時(shí)訓(xùn)練有關(guān)。

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揭秘四：棄偽存真

任何一個(gè)環(huán)節(jié)都不能忽視，任何一個(gè)環(huán)節(jié)出現(xiàn)問(wèn)題都可能導(dǎo)致“假陰性”或“假陽(yáng)性”。因此，為保障檢測(cè)的質(zhì)量，檢測(cè)結(jié)果將經(jīng)歷重重的比對(duì)與復(fù)核。

據(jù)介紹，檢測(cè)質(zhì)量的保障措施在檢測(cè)前就已經(jīng)開始了，樣本采集的醫(yī)務(wù)人員必須經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的培訓(xùn)和考核才能上崗，樣本的質(zhì)量與采集的技術(shù)密切相關(guān)，每一幀動(dòng)作流程都必須按規(guī)定進(jìn)行，樣本采集完后的護(hù)送工作都需按照嚴(yán)密的程序，由專人專道配送到實(shí)驗(yàn)室。

在檢測(cè)過(guò)程中，實(shí)驗(yàn)員保持始終如一的謹(jǐn)慎態(tài)度進(jìn)行每一次測(cè)試，不錯(cuò)過(guò)任何一個(gè)可疑樣本，針對(duì)可疑樣本，選用不同的試劑進(jìn)行復(fù)核確定，以防止“假陰性”的出現(xiàn)；其次，每進(jìn)行一批實(shí)驗(yàn)，均會(huì)隨機(jī)插入三個(gè)以上空白對(duì)照，針對(duì)陽(yáng)性樣本會(huì)進(jìn)行病毒基因的測(cè)序比對(duì)，以防止“假陽(yáng)性”的出現(xiàn)。

檢測(cè)后，定期隨機(jī)抽取檢測(cè)后的樣本送第三方實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比分析，同時(shí)也參加衛(wèi)生主管部門和廣東省臨床中心的室間質(zhì)評(píng)，保障檢測(cè)的準(zhǔn)確性。

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揭秘五：所向披靡

P3檢測(cè)團(tuán)隊(duì)目前有21人，實(shí)行一天三班制。在疫情非常時(shí)期，為了滿足檢測(cè)需求，縮短檢測(cè)時(shí)間，在原有團(tuán)隊(duì)基礎(chǔ)上，從風(fēng)濕免疫科、血液科等科室實(shí)驗(yàn)室調(diào)配增加人員。“偵察兵”的檢測(cè)團(tuán)隊(duì)70%以上是碩士以上學(xué)歷，均經(jīng)過(guò)分子生物學(xué)的培訓(xùn)和擁有PCR上崗證。
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譽(yù)為“偵察兵”的檢測(cè)團(tuán)隊(duì)。

P3實(shí)驗(yàn)室主任林劍國(guó)，2002年獲得華中科技大學(xué)傳染病學(xué)專業(yè)醫(yī)學(xué)博士，分別在美國(guó)疾控中心、Emory大學(xué)、Saint Louis 大學(xué)從事病毒發(fā)病機(jī)制及疫苗研制等方面工作達(dá)14年，在高致病性病毒的處理及生物安全方面積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)。

實(shí)驗(yàn)室嚴(yán)格遵照“新型冠狀病毒肺炎診療方案”及生物安全要求，檢測(cè)人員需在P3實(shí)驗(yàn)室負(fù)壓密閉的空間里穿著三級(jí)防護(hù)裝備，5個(gè)小時(shí)不吃不喝，甚至穿戴成人紙尿褲以解決上廁所的需要，隨時(shí)需要面對(duì)和克服因負(fù)壓差及嚴(yán)密裝備導(dǎo)致出現(xiàn)的頭暈、嘔吐等癥狀。

“他們與戰(zhàn)斗在病房里的醫(yī)護(hù)人員不同，他們藏在實(shí)驗(yàn)室里，每天與病毒近距離接觸，是別人看不見的‘最前線’。”廣東省第二人民醫(yī)院P3主任林劍國(guó)說(shuō)。

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?文中圖片均由作者提供

科技日?qǐng)?bào)記者 龍躍梅?

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